(一)PGD的方法

  运用PCD进行遗传学诊断的材料可以来源于试管婴儿过程中的各个阶段,常见的材料来源有极体、2- 10细胞(或更多)胚胎的卵裂球细胞、囊胚的滋养外胚层细胞。取材:用内径为5 40m的活检针。PCD的诊断技术也有多种,各种方法的运用有一定的条件,常用的有聚合酶链反应(PCR)和荧光原位杂交( lurescere in hidiai FISH) 等。可作染色体分析、DNA分析、RNA分析和蛋白质分析。

  1. PCR技术  运用PCR进行PCD的适用范围:

  ①X连锁隐性遗传病的性别鉴定。

  ②单基因相关遗传病致病基因(如β_地中海贫血、  血友病等)的检测。目前采用PCR进行PGD诊断有极体和卵裂球单个细胞分析两种方法。PCR技术能扩增样本中少量甚至痕迹量的DNA,因此,吸取1 ~ 2个卵裂球细胞做遗传学检查首先就选格了PCR技术。其检测的方法有单细胞PCR、 巢式                  PCR、半巢式PCR、结合(linkae)PCR、荧光PCR等。PCR 的扩增成功率在90%以上,  个别71%,极体61%左右.PCR的优点是需要样本量少,快速。PCR的缺点是无法检测染色体的非整倍体、染色体数目异常及某些结构异常(如易位),易受DNA污染的影响,等位基因退出alldrop out, ADO)出现率为0% ~ 23%,误诊可能(可用高度多形结合标志物hiehpolymorphic linked markers基因的方法加以避免)。巢式PCR ADO率是单卵裂球为22.8%(-珠蛋白基因),33 (-F508),第-极体为5.9% 9.6%。

  2. FISH技术  标记了荧光的单链DNA (探针)和与其互补的目标样本的DL(玻片上的标本)退火杂交,通过观察荧光信号的多少及在染色体上的位置来反映相应染色体的情况。为分析遗传病提供了一种简便、快速、可靠的方法。FISH 技术是目前诊断胚胎细胞遗传病和性别鉴定的首选方法它可以对染色体和DNA进行准确的研究,可以进行性别判定、非整倍体核型普查和染色体结构异常分析。将吸取的卵裂球制作成染色体标本,固定后的间期或中期染色体可以与特异性DNA探针(已标上荧光素) 发生杂交,  荧光显微镜下观察有无发出不同颜色荧光的亮点及数目以了解该极体1细胞是否正常。人类22种常染色体及x. Y染色体的探针均已商品化,经常检测的有 x. y,1,5,7,8,11,13,16, 18, 21, 22号等较常发生异常的染色体。针对许也可以自行多致病基因,如血友病、地中海病等,基因突变位点的探针电已商品化。也可以自行制备针对某一患者的特异探针。一次最多可杂交5 7种探针(不同颜色人).FISH的 优点如下:

  (1)既可用于间期(卵裂球细胞通常处于间期或有丝分裂期) 又可用于中期细胞。出)

  (2)费时少,过去杂交约面oh现可仅用1m -2日仍能来得的于中物机限的信号出现率。

  (3)不受DNA污染的影响。

  (4)可用于检测染色体(尤其是性染色体)数目及结构异常。(5)不存在ADO,有很高的敏感性与特异性。

  FISH的缺点如下:

  (1)受探针特异性影响较大,交叉杂交。

  (2)受荧光染料颜色的限制,一次最多只能杂交5 ~7种探针 (重复FISH可以部

  分克服此缺陷)。

  (3)在用多色探针时对杂交条件十分敏感,存在一定的杂交失败,正常胚胎约7%,异常胚胎则明显增高。

  (4)固定时有一定比例细胞丢失率,有报道达23%。(5) FISH的效率一般在: 80%以上。(6)信号丢失率:低于10%。(7)活检后胚胎崩解:低于5%。

  (8)其他:无细胞核,>1个核等也会影响结果。

  (二) PGD发展评估

  PGD发展相对缓慢的原因,与ICSI比较PCR、FISH 等方法的局限,嵌合体诊断困难,早期胚胎细胞数量减少,极体PGD的局限,  大众对PCD的看法与接受程度,相应的法律、法规不健全。但是PGD具有较强的技术优势,主要表现在如下4个方面。

  (1)可以避免终止妊娠的痛苦和道德上的问题。

  (2)提高了在高危夫妇中筛选出正常胚胎的效率,累积妊娠率优于自然周期。(3)目前结果显示不影响种植前胚胎的发育;提高种植率,降低流产率; PCD后的产科结果与常规IVF无明显区别。

  (4) PGD与围产诊断的互补和相辅相成,PGD 发展形势喜人。

  (三) PGD的发展方向

  捐胚、废胚的“PGD”,理论与实践上的准备,筛查需ICSI的男性患者中的遗传缺陷,对有缺陷者的胚胎及用形态异常精子、不成熟精子及精子细胞等受精的胚胎行常规PGD检查。对年龄较大、有异常孕产史者(如畸形儿,治疗性流产,反复流产)常规行PGD。PGD性别鉴定,避免X伴性遗传病的下传。胚胎性染色体及常染色体数目异常的PGD,防止这类遗传异常在后代的发生。筛查种植前胚胎的非整倍体与嵌合体,降低流产率,提高种植率。如条件允许,可对染色体结构异常的夫妇(如易位,倒位,重复,  缺失)进行PGD。展望未来,在建立人类基因库并了解人类全部基因(正常与致病)功能的基础上,对所有带有致病基因或有产生有遗传缺陷后代可能的高危人群均行PCD,则最终消灭 所有遗传性疾病应该不是一种梦想!